一、概述
藥物中的殘留溶劑系指在原料藥或輔料的生產(chǎn)中,以及制劑制備過(guò)程中使用的,但在工藝過(guò)程中未能*去除的有機(jī)溶劑。
按有機(jī)溶劑的毒性和對(duì)環(huán)境的危害,ICH將有機(jī)溶劑分為避免使用、限制使用、低毒和毒性依據(jù)尚不足四種情況。
因殘留溶劑會(huì)影響產(chǎn)品的安全性,故需對(duì)其進(jìn)行研究。
二、殘留溶劑檢查方法的選擇
殘留溶劑的測(cè)定一般采用氣相色譜法,推薦使用毛細(xì)管色譜柱-頂空進(jìn)樣系統(tǒng),當(dāng)然也可以使用普通填充柱,溶液直接進(jìn)樣方法。
對(duì)不宜采用氣相色譜法測(cè)定的含氮堿性化合物,如N-甲基吡咯烷酮等可采用其它方法,如離子色譜法等。
測(cè)定殘留溶劑應(yīng)從以下幾個(gè)方面考慮:確定被測(cè)的有機(jī)溶劑、選擇合適的色譜柱、制備供試品溶液和對(duì)照品溶液、選擇合適的進(jìn)樣方法和滿足檢測(cè)靈敏度要求的檢測(cè)器,下面分別進(jìn)行介紹:
1、確定被測(cè)的有機(jī)溶劑
根據(jù)制備工藝確定被測(cè)有機(jī)溶劑的范圍。通常應(yīng)對(duì)制備工藝過(guò)程中使用的二類(lèi)以上溶劑和重結(jié)晶用溶劑,以及根據(jù)工藝特點(diǎn)要求的其它溶劑進(jìn)行殘留量的研究。建議對(duì)合成最后三步使用的三類(lèi)溶劑也進(jìn)行研究,這樣能更好地對(duì)未知峰進(jìn)行歸屬;對(duì)制劑過(guò)程中使用的有機(jī)溶劑也建議考察其殘留情況,特別是緩、控釋微丸包衣過(guò)程使用的有機(jī)溶劑更應(yīng)引起注意。
殘留溶劑的限度要求同ICH的規(guī)定。
2、選擇合適的色譜柱
按照相似相溶的原理選擇色譜柱。毛細(xì)管柱有極性柱、非極性柱、弱極性柱和中等極性柱。填充柱有高分子多孔小球或涂漬適宜固定液的填充柱。
測(cè)定含氮的堿性有機(jī)溶劑時(shí),由于普通氣相色譜儀的不銹鋼管路、進(jìn)樣器襯管等對(duì)有機(jī)胺等含氮的堿性化合物具有較強(qiáng)的吸附作用,致使其檢出的靈敏度降低。通常采用弱極性色譜柱或經(jīng)堿處理過(guò)的色譜柱分析含氮的堿性有機(jī)溶劑,如果采用胺分析柱進(jìn)行分析,則效果更好。
3、供試品和對(duì)照品的制備
頂空進(jìn)樣方法通常以水為溶劑,對(duì)于非水溶性的藥物,可采用DMF、DMSO或其他適宜溶劑。溶液直接進(jìn)樣方法用水或合適的溶劑溶解樣品。
制備供試品的溶劑的選擇應(yīng)兼顧供試品和被測(cè)有機(jī)溶劑的溶解度,且所用溶劑應(yīng)不干擾被測(cè)有機(jī)溶劑的測(cè)定。水是溶劑,特別是頂空進(jìn)樣系統(tǒng)。因?yàn)樗胁缓袡C(jī)溶劑,故干擾較少,且在FID檢測(cè)器上,以水為溶劑時(shí),各殘留溶劑的靈敏度高。當(dāng)藥物不溶于水時(shí),可加入適當(dāng)?shù)乃峄驂A以增加藥物的溶解度,選用不揮發(fā)的酸或堿。以DMSO等為溶劑時(shí),可加入一定量的水以增加檢測(cè)的靈敏度,或用鹽析的方法增加靈敏度。測(cè)定含氮的堿性溶劑時(shí),供試品溶液應(yīng)不呈酸性,以免被測(cè)物與酸反應(yīng)后不易汽化。
對(duì)照品的制備方法應(yīng)與供試品的制備方法相同。在申報(bào)資料中發(fā)現(xiàn)對(duì)照品(溶液)為直接進(jìn)樣,供試品則為固體直接頂空進(jìn)樣,供試品和對(duì)照品不但制備方法不同,而且進(jìn)樣方法和進(jìn)樣量也不同,無(wú)法進(jìn)行比較。提請(qǐng)申報(bào)單位注意。
4、供試品溶液和對(duì)照品溶液濃度的確定
配制供試品溶液的濃度應(yīng)滿足定量測(cè)定的需要,一般供試品取樣量在0.1~1g之間。限度檢查時(shí)對(duì)照品溶液的濃度可按規(guī)定的限度配制,定量測(cè)定時(shí)按實(shí)際殘留量配制,濃度相差以不超過(guò)2倍為宜。
5、檢測(cè)器的選擇
一般選用FID檢測(cè)器,對(duì)含鹵素的有機(jī)溶劑如氯仿等,采用ECD檢測(cè)器可得到更高的靈敏度。
通??筛鶕?jù)藥物溶劑的殘留情況選擇合適的檢查方法。當(dāng)需要檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量不多,且極性差異較小時(shí),可選擇毛細(xì)管色譜柱-頂空進(jìn)樣-等溫法。當(dāng)需要檢查的有機(jī)溶劑數(shù)量較多,且極性、沸點(diǎn)差異較大時(shí),可選擇毛細(xì)管色譜柱-頂空進(jìn)樣-程序升溫法;也可選擇填充柱或適宜極性的毛細(xì)管柱直接進(jìn)樣法。限度檢查(一類(lèi)、部分二類(lèi)溶劑)時(shí)采用內(nèi)標(biāo)法或外標(biāo)法;定量測(cè)定(含量超過(guò)0.1%的二類(lèi)或需要定量控制的三類(lèi)溶劑)時(shí)采用內(nèi)標(biāo)法或標(biāo)準(zhǔn)加入法。
頂空進(jìn)樣法還要對(duì)頂空溫度和頂空時(shí)間進(jìn)行選擇。
頂空溫度應(yīng)根據(jù)溶解供試品溶劑的特性及供試品中殘留溶劑的沸點(diǎn)選擇。以水為溶劑及測(cè)定低沸點(diǎn)殘留溶劑時(shí),頂空溫度不宜超過(guò)85℃;測(cè)定沸點(diǎn)較高的殘留溶劑時(shí),通常選擇較高的頂空溫度;但此時(shí)應(yīng)兼顧供試品的熱分解特性,盡量避免供試品產(chǎn)生的揮發(fā)性熱分解產(chǎn)物干擾測(cè)定結(jié)果。以DMSO為溶劑時(shí),頂空溫度不宜超過(guò)115℃。例如,在申報(bào)資料中發(fā)現(xiàn),以水為溶劑,頂空溫度為100℃,柱溫60℃,結(jié)果高濃度的乙腈比低濃度的二氯甲烷的峰面積還小,原因是頂空溫度太高,大量的水被蒸發(fā)(或濃度被稀釋),隨著水蒸汽的凝結(jié),在水中溶解度大的乙腈的靈敏度下降,產(chǎn)生了與事實(shí)不符的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
頂空時(shí)間是要確保供試品溶液的氣-液兩相達(dá)到平衡,一般通過(guò)測(cè)定頂空時(shí)間與頂空氣體濃度的濃度—時(shí)間曲線來(lái)確定。頂空時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),一般為30~45分鐘,如果超過(guò)60min,可能引起頂空瓶的氣密性變差,導(dǎo)致定量的準(zhǔn)確性降低。如果平衡時(shí)間選擇10分鐘,就不能保證氣-液兩相達(dá)到平衡。注意對(duì)照品溶液與供試品溶液必須使用相同的頂空條件。
甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮等不適宜用頂空法測(cè)定。
三、殘留溶劑檢查方法的驗(yàn)證
1、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
柱效:用被測(cè)物的色譜峰計(jì)算,填充柱法的理論板數(shù)應(yīng)大于1000,毛細(xì)管色譜柱的理論板數(shù)應(yīng)大于5000。
分離度:色譜圖中被測(cè)物色譜峰與其相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。
重復(fù)性:以內(nèi)標(biāo)法測(cè)定時(shí),對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次,所得被測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)不大于5%;以外標(biāo)法測(cè)定時(shí),所得被測(cè)物峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)不大于10%。
2、準(zhǔn)確度
在規(guī)定的范圍內(nèi),至少9個(gè)測(cè)定結(jié)果。設(shè)計(jì)三個(gè)不同的濃度進(jìn)行測(cè)定,計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,含量測(cè)定的回收率應(yīng)大于98%。
進(jìn)行回收率試驗(yàn)時(shí),由于采用頂空進(jìn)樣系統(tǒng),供試品與對(duì)照品處于不*相同的基質(zhì)中,此時(shí)應(yīng)考慮氣-液平衡過(guò)程中的基質(zhì)效應(yīng)。標(biāo)準(zhǔn)加入法可以消除供試品溶液基質(zhì)與對(duì)照品溶液基質(zhì)不同所致的基質(zhì)效應(yīng)的影響,故通常采用標(biāo)準(zhǔn)加入法驗(yàn)證定量方法的準(zhǔn)確性。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)加入法與其它定量方法的結(jié)果不一致時(shí),應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法的結(jié)果為準(zhǔn)。
標(biāo)準(zhǔn)加入法為精密稱(量)取被測(cè)定的殘留溶劑對(duì)照品適量,配制成適當(dāng)濃度的對(duì)照品溶液,取一定量精密加入到供試品溶液中,根據(jù)外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測(cè)定殘留留劑的含量,再扣除加入的對(duì)照品溶液的含量,即得供試液溶液中殘留溶劑的含量;或按下式計(jì)算殘留溶劑的量。Cx=ΔCx/[(Ais/Ax)-1],式中Cx為供試品中組分X的濃度;Ax為供試品中組分X的色譜峰面積;ΔCx為所加入的已知濃度的被測(cè)組分對(duì)照品;Ais為加入對(duì)照品后組分X的色譜峰面積。
3、專屬性
對(duì)各種殘留溶劑定位和進(jìn)行混合溶劑的分離度試驗(yàn),并附代表性圖譜。
供試品中的未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解產(chǎn)物易對(duì)殘留溶劑的測(cè)定產(chǎn)生干擾。如果未知雜質(zhì)或其揮發(fā)性熱降解產(chǎn)物與被測(cè)物的保留值相同(共出峰),或熱降解產(chǎn)物與被測(cè)物的結(jié)構(gòu)相同(如甲氧基熱裂解產(chǎn)生甲醇)時(shí),應(yīng)通過(guò)試驗(yàn)排除干擾。對(duì)*類(lèi)干擾,通常采用在另一種極性相反的色譜柱系統(tǒng)中對(duì)相同樣品進(jìn)行測(cè)定,比較不同色譜系統(tǒng)的測(cè)定結(jié)果的方法。如二者結(jié)果一致,則可以排除測(cè)定中有共出峰的干擾;如二者結(jié)果不一致,則表明測(cè)定中有共出峰的干擾。對(duì)第二類(lèi)干擾,通常要通過(guò)測(cè)定已知不含該溶劑的對(duì)照樣品來(lái)加以判斷。
4、其它
可根據(jù)是限度檢查還是定量測(cè)定選擇具體的驗(yàn)證內(nèi)容。
精密度:重復(fù)性和重現(xiàn)性,在規(guī)定范圍內(nèi),至少9個(gè)測(cè)定結(jié)果。設(shè)計(jì)三個(gè)不同的濃度進(jìn)行測(cè)定。一般保留時(shí)間的RSD<1%,峰面積的RSD<5%。
線性:至少制備5個(gè)濃度,R=0.99。附回歸方程、相關(guān)系數(shù)和線性圖。
檢測(cè)限和定量限:檢測(cè)限為信噪比3:1或2:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量。定量測(cè)定時(shí)需驗(yàn)證定量限,其限度為信噪比10:1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量。同時(shí)說(shuō)明測(cè)試的過(guò)程和結(jié)果,并附圖譜。
傳真:400-702-5170/03
地址:成都市成華區(qū)龍?zhí)豆I(yè)園區(qū)航天路118號(hào)聯(lián)東U谷1號(hào)樓2單元3樓301